㈠ 钙离子荧光探针的应用详解
吸收波长/发射波长：506nm /526nm(低/高钙)
保存与使用：粉状的FLUO-3AM应保存于-20度以上。建议使用DMSO作为溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均须放置至室温。溶解过程可能会比较慢。用无水的DMSO溶解的FLUO-3AM长期保存，应严格密封，并保存于-20度。使用前，将保存液放置至室温后再打开。可避免AM探针在长期的保存过程中水解。 1、过程概述
用于细胞内钙离子检测时，Fluo-3 AM的常用浓度为5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的适当溶液和细胞一起在37℃孵育30-60分钟进行荧光探针装载，随后适当洗涤，洗涤后可以考虑适当再孵育20-30分钟以确保Fluo-3 AM在细胞内完全转变成Fluo-3。然后在流式细胞仪上进行检测。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按实际需要的摩尔浓度折算，无水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO储存液。如出现难溶现象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事项：
1、荧光染料有淬灭问题，应尽量避光保存；
2、实验时注意个人防护，戴手套、口罩；
五、应用举例
2、贮存液的配制（5000μM/L）
按照说明书，计算0.1mg 的摩尔数为0.089μM ，则需加DMSO18uL，微量加样器反复吹打混匀后分装，按说明书要求避光-20度冰冻保存。
（二）应用
每毫升细胞悬液中加入1 uL，则Fluo-3AM的使用终浓度为5μM/L
Hoechst 33258染色
固定液 50 ml
Hoechst 33258染色液 50 ml
抗荧光淬灭封片液 5 ml
说明书 1 份
保存条件：
4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本试剂盒自订购之日起六个月内有效。
注意事项：
Ø 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
Ø 需PBS或0.9%NaCl溶液。
Ø 需盖玻片与载玻片。
Ø 荧光物质均易发生淬灭，染色后的样品宜避光保存。
Ø 在使用抗淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭，但仍宜尽量避光。
