㈠ 鈣離子熒光探針的應用詳解
吸收波長/發射波長：506nm /526nm(低/高鈣)
保存與使用：粉狀的FLUO-3AM應保存於-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前，FLUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過程可能會比較慢。用無水的DMSO溶解的FLUO-3AM長期保存，應嚴格密封，並保存於-20度。使用前，將保存液放置至室溫後再打開。可避免AM探針在長期的保存過程中水解。 1、過程概述
用於細胞內鈣離子檢測時，Fluo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當溶液和細胞一起在37℃孵育30-60分鍾進行熒光探針裝載，隨後適當洗滌，洗滌後可以考慮適當再孵育20-30分鍾以確保Fluo-3 AM在細胞內完全轉變成Fluo-3。然後在流式細胞儀上進行檢測。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實際需要的摩爾濃度折算，無水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲存液。如出現難溶現象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事項：
1、熒光染料有淬滅問題，應盡量避光保存；
2、實驗時注意個人防護，戴手套、口罩；
五、應用舉例
2、貯存液的配製（5000μM/L）
按照說明書，計算0.1mg 的摩爾數為0.089μM ，則需加DMSO18uL，微量加樣器反復吹打混勻後分裝，按說明書要求避光-20度冰凍保存。
（二）應用
每毫升細胞懸液中加入1 uL，則Fluo-3AM的使用終濃度為5μM/L
Hoechst 33258染色
固定液 50 ml
Hoechst 33258染色液 50 ml
抗熒光淬滅封片液 5 ml
說明書 1 份
保存條件：
4℃保存，Hoechst 33258染色液需4℃避光保存。本試劑盒自訂購之日起六個月內有效。
注意事項：
Ø 需熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
Ø 需PBS或0.9%NaCl溶液。
Ø 需蓋玻片與載玻片。
Ø 熒光物質均易發生淬滅，染色後的樣品宜避光保存。
Ø 在使用抗淬滅封片液的情況下可以減緩淬滅，但仍宜盡量避光。
